Det skriver EUs handelskommissær Cecilia Malmström på Twitter. Hun sier avgiften er «uforsvarlig» og «uberettiget» og at den strider mot reglene til WTO.
Trump og hans regjering innførte ekstra avgifter på olivenene i fjor, og la til grunn at disse er subsidiert og solgt til priser under den reelle verdien.
EU har arbeidet i kulissene for å få amerikanerne til å ombestemme seg, men Brussel har nå «konkludert med at våre argumenter faller for døve ører», sier EUs landbrukskommissær Phil Hogan.
WTOs regler sier at de to partene nå har 60 dager på seg til å komme til enighet.
Det amerikanske handelsdepartementet anslår at spanske oliven blir solgt for mellom 16 og 25 prosent under sin reelle verdi. Spania eksporterte oliven til USA for 67,6 millioner dollar i 2017. Det tilsvarer om lag 576 millioner kroner.