EU-kommisjonen har holdt et øye med Amazons dobbeltrolle, da selskapet både opererer både som en markedsplass og som forhandler.
EUs konkurransekommissær, Margrethe Vestager, er i gang med en innledende undersøkelse.
– Jeg har besluttet å se nøye på Amazons forretningspraksis og dets dobbeltrolle for å vurdere om selskapet overholder EUs konkurransebestemmelser, sier Vestager i en uttalelse.
Hun understreker at europeiske forbrukere i økende grad handler på nettet, og at e-handel har styrket konkurransen i bransjen, gitt flere muligheter og bedre priser.
– Vi er nødt til å sikre at store nettplattformer ikke eliminerer fordelene med urettferdig konkurranseatferd, sier Vestager.
Amazon svarer onsdag at selskapet vil samarbeide.
– Vi vil samarbeide fullt ut med EU-kommisjonen og fortsette å jobbe hardt for å støtte bedrifter av alle størrelser og hjelpe dem med å vokse.
Den formelle undersøkelsen blir en del av EUs arbeid med å innskrenke dominansen til store globale aktører som Google, Facebook og Apple.